معرف BCIP (نمک دی‌سدیم) – 5-BROMO-6-CHLORO-3 INDOLYL- PHOSPHATE di-SODIUM (BCIP)

5-برومو-6-کلرو-3-ایندوکسیل فسفات (BCIP) یک سوبسترای کروموژنیک برای آنزیم **آلکالین فسفاتاز** (Alkaline Phosphatase – AP) است. این ماده تقریباً همیشه در ترکیب با ماده دیگری به نام **NBT** (نیترو بلو تترازولیوم) استفاده می‌شود. سیستم BCIP/NBT یکی از حساس‌ترین و محبوب‌ترین روش‌های رنگ‌آمیزی در تکنیک‌های ایمونولوژی و مولکولی است. مکانیسم عمل بدین صورت است: آنزیم آلکالین فسفاتاز، گروه فسفات را از BCIP جدا می‌کند و یک محصول ایندوکسیل تولید می‌کند. این محصول سپس با NBT واکنش داده (NBT را احیا می‌کند) و خود دایمر می‌شود. نتیجه نهایی این واکنش زنجیره‌ای، تشکیل یک رسوب نامحلول به رنگ **بنفش تیره تا سیاه** است که روی غشا یا بافت باقی می‌ماند. این رسوب بسیار پایدار است و برخلاف برخی روش‌های فلورسانس یا کمولومینسانس، با گذشت زمان محو نمی‌شود.

کاربرد در وسترن بلات و بافت‌شناسی

در تکنیک وسترن بلات (Western Blot)، از BCIP/NBT برای آشکارسازی باندهای پروتئینی که توسط آنتی‌بادی‌های متصل به آلکالین فسفاتاز شناسایی شده‌اند، استفاده می‌شود. در ایمونوهیستوشیمی (IHC) و هیبریداسیون در محل (In Situ Hybridization)، این سیستم برای تعیین محل دقیق آنتی‌ژن‌ها یا توالی‌های DNA/RNA در بافت استفاده می‌شود. حساسیت بالای این روش اجازه می‌دهد تا مقادیر پیکوگرمی از هدف شناسایی شود. فرم نمک دی‌سدیم BCIP در آب محلول است که کاربری آن را آسان می‌کند.

کاربردها و مصارف

• آشکارسازی رنگی در وسترن بلات، ساترن بلات و ناترن بلات.
• رنگ‌آمیزی بافت در ایمونوهیستوشیمی (IHC) و ISH.
• غربالگری کلونی‌های باکتریایی بیان‌کننده آلکالین فسفاتاز.
• تشخیص پروتئین‌ها و اسیدهای نوکلئیک با حساسیت بالا.

نکات ایمنی

• حساسیت: به نور و رطوبت حساس است.
• سمیت: NBT (همراه آن) سمی است، اما خود BCIP سمیت کمتری دارد.
• نگهداری: در فریزر (منفی ۲۰ درجه یا منفی ۱۵) نگهداری شود.
• آماده‌سازی: معمولاً در بافر Tris با pH بالا (9.5) استفاده می‌شود.