بریلیانت بلو R-250 (کوماسی بلو) – BRILLIANT BLUE R-250

بریلیانت بلو R-250 که اغلب با نام تجاری کوماسی بریلیانت بلو (Coomassie Brilliant Blue) شناخته می‌شود، رایج‌ترین و استانداردترین رنگ برای آشکارسازی پروتئین‌ها در ژل‌های الکتروفورز SDS-PAGE است. پسوند “R” مخفف “Reddish” (متمایل به قرمز) است که آن را از نوع G-250 (Greenish) متمایز می‌کند. این رنگ یک تری‌فنیل‌متان آنیونی است که در محیط اسیدی (حاوی اسید استیک و متانول) به گروه‌های آمینی بازی پروتئین‌ها (به ویژه اسید آمینه آرژینین، و همچنین لیزین و هیستیدین) و همچنین به برهم‌کنش‌های هیدروفوب متصل می‌شود. اتصال رنگ به پروتئین باعث تغییر در جذب نوری و ایجاد رنگ آبی شدید می‌شود که امکان مشاهده باند پروتئینی را فراهم می‌کند.

کوماسی R-250 حساسیت بسیار بالایی دارد و می‌تواند مقادیر پروتئین را تا حد ۰.۵ میکروگرم (۵۰۰ نانوگرم) در هر باند تشخیص دهد. فرآیند رنگ‌آمیزی با این معرف شامل دو مرحله “رنگ‌آمیزی” (Staining) و “رنگ‌بری” (Destaining) است؛ در مرحله رنگ‌بری، رنگ اضافی از زمینه ژل شسته می‌شود و باندهای آبی پروتئین روی زمینه شفاف ظاهر می‌شوند. این رنگ نسبت به رنگ‌آمیزی نیترات نقره (Silver Stain) حساسیت کمتری دارد اما کار با آن بسیار آسان‌تر، ارزان‌تر و تکرارپذیرتر است و همچنین با آنالیزهای بعدی مانند طیف‌سنجی جرمی (Mass Spec) سازگارتر است. این گرید بیولوژی مولکولی فاقد ذرات نامحلول و ناخالصی‌هایی است که باعث ایجاد لکه در ژل می‌شوند.

کاربردها و مصارف

• رنگ‌آمیزی استاندارد پروتئین‌ها در ژل‌های پلی‌اکریل‌آمید (SDS-PAGE).
• آشکارسازی پروتئین روی غشاهای نیتروسلولز و PVDF (وسترن بلات).
• تعیین خلوص پروتئین پس از مراحل تخلیص.
• جایگزین ارزان برای رنگ‌آمیزی نقره.

نکات ایمنی

• تفاوت با G-250: نوع R-250 حساس‌تر است اما به مرحله رنگ‌بری (Destaining) طولانی‌تری نیاز دارد.
• لکه: بسیار قوی است و پوست و لباس را به شدت رنگ می‌کند (استفاده از دستکش الزامی است).
• نگهداری: در دمای اتاق و جای خشک.