کوماسی بریلیانت بلو G-250 – COOMASSIE BRILLIANT BLUE G 250

کوماسی بریلیانت بلو G-250 (Coomassie Brilliant Blue G-250) یک رنگ تری‌فنیل‌متان است که حرف “G” در نام آن مخفف “Greenish” (متمایل به سبز) می‌باشد. این رنگ اساس و پایه یکی از رایج‌ترین و سریع‌ترین روش‌های اندازه‌گیری غلظت پروتئین در جهان، یعنی “تست بردفورد” (Bradford Assay) است. مکانیسم عمل این رنگ بسیار جالب است: در حالت آزاد و محیط اسیدی، مولکول رنگ به فرم کاتیونی است و رنگ قرمز-قهوه‌ای (با جذب ۴۶۵ نانومتر) دارد. اما هنگامی که به پروتئین متصل می‌شود (عمدتاً از طریق برهم‌کنش با اسیدهای آمینه بازی و هیدروفوب)، به فرم آنیونی آبی رنگ (با جذب ۵۹۵ نانومتر) تغییر می‌کند. شدت رنگ آبی ایجاد شده مستقیماً با غلظت پروتئین در نمونه متناسب است. این روش بسیار سریع (کمتر از ۵ دقیقه)، حساس و مقاوم در برابر تداخل بسیاری از مواد شیمیایی (غیر از دترجنت‌ها) است.

علاوه بر تست بردفورد، از فرم کلوئیدی کوماسی G-250 (Colloidal Coomassie) برای رنگ‌آمیزی ژل‌های الکتروفورز (PAGE) استفاده می‌شود که حساسیت بسیار بالاتری نسبت به نوع R-250 دارد و زمینه ژل را کمتر رنگ می‌کند (نیاز به رنگ‌بری کمتری دارد).

کاربردها و مصارف

• معرف اصلی در روش سنجش پروتئین بردفورد (Bradford Protein Assay).
• رنگ‌آمیزی حساس پروتئین‌ها در ژل پلی‌اکریل‌آمید (Colloidal staining).
• تعیین کمی پروتئین در محلول.

نکات ایمنی

• حساسیت: تا حدود ۱ میکروگرم پروتئین را تشخیص می‌دهد.
• تداخل: با دترجنت‌ها (مانند SDS) ناسازگار است (رسوب می‌دهد).
• نگهداری: در جای خشک و دمای اتاق.