پارا-نیتروفنیل فسفات (pNPP) – p-NITROPHENYL PHOSPHATE DISODIUM SALT (Hexahydrate)

پارا-نیتروفنیل فسفات (pNPP) نمک دی‌سدیم هگزاهیدرات، سوبسترای ارجح و استاندارد طلایی برای سنجش فعالیت آنزیم آلکالین فسفاتاز (Alkaline Phosphatase – AP) در تکنیک‌های ایمونواسی مانند **ELISA** و اسپکتروفتومتری است. این ماده پودری کریستالی و سفید تا زرد کم‌رنگ است که در آب به خوبی حل می‌شود. مکانیسم عمل آن بسیار دقیق و حساس است: pNPP یک استر فسفات غیر رنگی است؛ هنگامی که در معرض آنزیم آلکالین فسفاتاز قرار می‌گیرد، گروه فسفات آن هیدرولیز شده و پارا-نیتروفنول (p-Nitrophenol) آزاد می‌شود. پارا-نیتروفنول در محیط قلیایی (که محیط بهینه فعالیت آنزیم AP است) به فرم فنولات زرد رنگ تبدیل می‌شود که دارای جذب نوری قوی در طول موج **405 نانومتر** است. شدت رنگ زرد تولید شده رابطه خطی مستقیمی با غلظت آنزیم دارد، که امکان اندازه‌گیری کمی و دقیق آنتی‌ژن‌ها یا آنتی‌بادی‌ها را در تست‌های الایزا فراهم می‌کند.

در پروتکل‌های آزمایشگاهی، واکنش معمولاً با افزودن یک محلول قلیایی قوی (مانند NaOH) متوقف می‌شود (Stop Solution) که باعث تثبیت رنگ و افزایش شدت جذب نوری می‌شود. pNPP به دلیل حساسیت بالا، پس‌زمینه نوری کم و دامنه خطی وسیع، برای تشخیص مقادیر ناچیز پروتئین در تحقیقات پروتئومیکس، غربالگری دارویی و تشخیص‌های بالینی ترجیح داده می‌شود. گرید بیولوژی مولکولی این محصول فاقد فسفات معدنی آزاد (که مهارکننده آنزیم است) می‌باشد و خلوص بالای آن تکرارپذیری نتایج را تضمین می‌کند.

کاربردها و مصارف

• سوبسترای اصلی در تست‌های ELISA برای کونژوگه‌های آلکالین فسفاتاز.
• سنجش فعالیت آنزیم‌های فسفاتاز (Acid/Alkaline Phosphatase Assay).
• غربالگری آنتی‌بادی‌های مونوکلونال.
• مطالعات کینتیک آنزیمی.

نکات ایمنی

• حساسیت نوری: پودر و محلول آن به نور حساس هستند و باید در تاریکی نگهداری شوند (زرد شدن پیش از موعد نشانه فساد است).
• ایمنی: محرک است.
• نگهداری: در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد (یخچال).