محیط کشت نیترات آگار (Nitrate Agar)

مقدمه و کاربرد دقیق

تست احیای نیترات یک آزمون کلیدی برای تمایز گونه‌های مختلف باکتری است. Nitrate Agar فرمولاسیون استاندارد برای انجام این تست فراهم می‌کند. نتیجه این تست با افزودن معرف‌های خاص پس از دوره انکوباسیون مشخص می‌شود. نسخه‌های گیاهی (VEG.) این محیط از پپتون‌های با منشأ گیاهی برای کاربردهای خاص استفاده می‌کنند.

اساس عملکرد و نقش اجزاء

این محیط یک بستر مغذی پایه شامل پپتون و عصاره گوشت است. جزء کلیدی آن پتاسیم نیترات (KNO₃) به عنوان سوبسترای نیترات است. میکروارگانیسم‌هایی که دارای آنزیم نیتراتاز هستند، نیترات را به نیتریت ($NO_2^−$) احیا می‌کنند.

برای تفسیر تست:

1. پس از انکوباسیون، معرف A (سولفانیلیک اسید) و معرف B (آلفا-نفتیل‌آمین) اضافه می‌شود. اگر نیتریت در محیط وجود داشته باشد، با این معرف‌ها واکنش داده و رنگ قرمز ایجاد می‌کند (نتیجه مثبت).

2. اگر رنگ قرمز ظاهر نشد، دو احتمال وجود دارد: الف) نیترات اصلاً احیا نشده (نتیجه منفی). ب) نیترات به طور کامل به گاز نیتروژن ($N_2$) یا ترکیبات نیتروژنی دیگر احیا شده است.

3. برای تمایز این دو حالت، مقدار کمی پودر روی (Zinc) به لوله اضافه می‌شود. روی، نیترات باقی‌مانده را به نیتریت احیا می‌کند. اگر پس از افزودن روی رنگ قرمز ایجاد شود، به این معنی است که نیترات در محیط وجود داشته و باکتری آن را احیا نکرده است (نتیجه منفی). اگر رنگی ایجاد نشود، به این معنی است که نیترات توسط باکتری به طور کامل مصرف شده و به گاز تبدیل شده است (نتیجه مثبت برای احیای کامل نیترات).

دستورالعمل آماده‌سازی

دستورالعمل زیر یک راهنمای کلی است:

1. مقدار ۲۳ گرم از پودر را در ۱ لیتر آب مقطر حل کنید.

2. محلول را حرارت داده تا کاملاً حل شود.

3. در لوله‌های آزمایش توزیع کرده و با اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل کنید.

راهنمای کلی و آموزشی

آماده‌سازی صحیح محیط‌های کشت دهیدراته برای دستیابی به نتایج قابل اعتماد در آزمایشگاه میکروبیولوژی ضروری است. مراحل زیر یک راهنمای کلی برای این فرآیند است:

1. توزین دقیق: همواره از ترازوی دقیق برای وزن کردن مقدار پودر مورد نیاز (طبق دستورالعمل روی بسته‌بندی) استفاده کنید.
2. انحلال: پودر وزن‌شده را به حجم مشخصی از آب مقطر یا دیونیزه با کیفیت بالا اضافه کنید. برای انحلال کامل، ظرف را به آرامی تکان داده و در صورت لزوم حرارت دهید تا محلول شفاف شود.
3. استریل‌سازی: محیط آماده شده را با استفاده از اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد و فشار ۱۵ پوند بر اینچ مربع به مدت ۱۵ دقیقه استریل کنید (مگر اینکه دستورالعمل خاصی برای محیط ذکر شده باشد که به حرارت حساس است).
4. ریختن در پلیت یا لوله: پس از اتوکلاو، اجازه دهید محیط تا دمای حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد خنک شود. سپس در شرایط استریل (زیر هود لامینار) آن را در پلیت‌ها یا لوله‌های استریل توزیع کنید.
5. کنترل کیفی: چند پلیت از هر بچ را به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت در انکوباتور ۳۵-۳۷ درجه سانتی‌گراد قرار دهید تا از استریل بودن و عدم آلودگی آن‌ها اطمینان حاصل کنید.

خرید و استعلام قیمت

برای تهیه این محصول با بالاترین کیفیت و اطمینان از اصالت کالا، اکسیر لایف بهترین انتخاب شماست. ما با تضمین ارائه گواهی آنالیز (COA) معتبر، ارسال سریع به سراسر کشور و ارائه مشاوره تخصصی و رایگان، شما را در دستیابی به نتایج دقیق و قابل اعتماد یاری می‌کنیم. جهت ثبت سفارش و دریافت مشاوره با ما در تماس باشید.