محیط کشت شکلات آگار بیس (Chocolate Agar Base)

محیط کشت Chocolate Agar Base یک محیط پایه است که برای تهیه محیط شکلات آگار به کار می‌رود. نام “شکلات” به دلیل رنگ قهوه‌ای تیره محیط پس از آماده‌سازی است و هیچ ارتباطی با شکلات واقعی ندارد. این محیط یکی از غنی‌ترین محیط‌های کشت غیرانتخابی در میکروبیولوژی بالینی است.

اساس عملکرد و نقش اجزاء

این محیط پایه حاوی پپتون‌های غنی و نشاسته است. برای تهیه محیط نهایی، **خون دفیبرینه استریل** (معمولاً خون گوسفند یا اسب) به محیط پایه در دمای بالا (حدود ۷۵-۸۰ درجه سانتی‌گراد) اضافه می‌شود. این حرارت باعث لیز شدن (پاره شدن) گلبول‌های قرمز و آزاد شدن فاکتورهای رشد داخل سلولی به داخل محیط می‌شود:

• فاکتور X (همین): که به حرارت مقاوم است.
• فاکتور V (NAD): که به حرارت حساس است اما در حضور آنزیم‌های موجود در خون آزاد می‌شود.

این دو فاکتور برای رشد گونه‌های Haemophilus ضروری هستند. این محیط غنی همچنین رشد پاتوژن‌های سخت‌رشد دیگر مانند Neisseria را نیز به خوبی حمایت می‌کند.

فرمولاسیون (گرم بر لیتر):

دستورالعمل آماده‌سازی:

۴۲ گرم از پودر پایه را در ۱۰۰۰ میلی‌لیتر آب مقطر حل کنید. حرارت دهید تا به جوش آید و کاملا حل شود. سپس با اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل کنید. پس از اتوکلاو، محیط را تا دمای ۷۵-۸۰ درجه سانتی‌گراد خنک کرده، ۵-۷٪ خون دفیبرینه استریل را به صورت اسپتیک به آن اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید تا رنگ قهوه‌ای شکلاتی یکنواخت ایجاد شود. سپس در پلیت‌ها بریزید.

راهنمای کلی و آموزشی آماده‌سازی محیط‌های کشت

آماده‌سازی صحیح محیط‌های کشت دهیدراته برای دستیابی به نتایج قابل اعتماد در آزمایشگاه میکروبیولوژی ضروری است. مراحل زیر یک راهنمای کلی برای این فرآیند است:

1. توزین دقیق: همواره از ترازوی دقیق برای وزن کردن مقدار پودر مورد نیاز (طبق دستورالعمل روی بسته‌بندی) استفاده کنید.
2. انحلال: پودر وزن‌شده را به حجم مشخصی از آب مقطر یا دیونیزه با کیفیت بالا اضافه کنید. برای انحلال کامل، ظرف را به آرامی تکان داده و در صورت لزوم حرارت دهید تا محلول شفاف شود.
3. استریل‌سازی: محیط آماده شده را با استفاده از اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد و فشار ۱۵ پوند بر اینچ مربع به مدت ۱۵ دقیقه استریل کنید (مگر اینکه دستورالعمل خاصی برای محیط ذکر شده باشد که به حرارت حساس است).
4. ریختن در پلیت یا لوله: پس از اتوکلاو، اجازه دهید محیط تا دمای حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد خنک شود. سپس در شرایط استریل (زیر هود لامینار) آن را در پلیت‌ها یا لوله‌های استریل توزیع کنید.
5. کنترل کیفی: چند پلیت از هر بچ را به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت در انکوباتور ۳۵-۳۷ درجه سانتی‌گراد قرار دهید تا از استریل بودن و عدم آلودگی آن‌ها اطمینان حاصل کنید.

خرید و استعلام قیمت:

برای تهیه محیط کشت Chocolate Agar Base و مکمل‌های مربوطه، فروشگاه اکسیر لایف در خدمت شماست. ما با ارائه مشاوره تخصصی، تضمین اصالت کالا و ارسال سریع، خریدی مطمئن را برای شما رقم می‌زنیم.