بافر HEPES (اسید آزاد) – HEPES

بافر HEPES با نام علمی 4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid، یکی از محبوب‌ترین و کارآمدترین بافرهای زویتر-یونی خانواده “Good’s Buffers” است. این ماده پودری سفید کریستالی است که برای کنترل pH در محدوده فیزیولوژیکی **6.8 تا 8.2** طراحی شده است. pKa آن در ۳۷ درجه سانتی‌گراد حدود 7.3 است که دقیقاً منطبق با pH خون و سیتوپلاسم سلول‌های پستانداران است. ویژگی برجسته HEPES، پایداری شیمیایی بالا، عدم نفوذ به غشای سلولی، عدم تشکیل کمپلکس با یون‌های فلزی (برخلاف فسفات) و عدم سمیت برای سلول‌هاست. این ویژگی‌ها آن را به بافر انتخابی برای **محیط‌های کشت سلولی** (به ویژه زمانی که کنترل دقیق CO2 امکان‌پذیر نیست) و واکنش‌های آنزیمی حساس تبدیل کرده است.

HEPES همچنین در بافرهای استخراج پروتئین، الکتروفورز و میکروسکوپی الکترونی استفاده می‌شود. این فرم (Free Acid) اسیدی است و برای رسیدن به pH مطلوب باید با NaOH یا KOH تیتر شود.

کاربردها و مصارف

• بافرینگ محیط‌های کشت سلول و بافت (جایگزین یا مکمل بی‌کربنات).
• بافر رانینگ و لودینگ در الکتروفورز پروتئین.
• تحقیقات آنزیم‌شناسی و فسفوریلاسیون اکسیداتیو.
• تهیه بافرهای لیز سلولی و استخراج اندامک‌ها.

نکات ایمنی

• حلالیت: در آب به خوبی حل می‌شود.
• حساسیت نوری: در حضور نور ممکن است رادیکال آزاد تولید کند (در تاریکی نگهداری شود).
• نگهداری: در جای خشک.